2010 Fiscal Year Annual Research Report
分光・ラマンイメージングが可能なライトシート型顕微鏡λ―DSLMの開発
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21770177
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| Research Institution | National Institute for Basic Biology |
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Principal Investigator |
野中 茂紀 基礎生物学研究所, 時空間制御研究室, 准教授 (90435529)
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| Keywords | 発生・分化 / 細胞・組織 / 共焦点顕微鏡 |
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| Research Abstract |
深部観察性能と低光毒性から発生学の研究に適した光シート型顕微鏡DSLM(Digital Scanned Light-sheet Microscope)に分光機能を追加した新しい顕微鏡システム(λ一DSLM)を作製した。試料ステージには、4軸方向(XYZθ)に走査するためのモータデバイスを搭載し、従来のDSLMと同様に様々な方向からの観察を可能にした。観察側の光学系は、対物レンズ・ロングパスフィルター・結像レンズで構成され、結像面に分光スリットが配置されている。本装置の要である分光器には、透過型VPHG(Volume Phase Holographic Grating)を用いることで低迷光かつ高波長分解能を実現した。スリットを通過した光は、スリット開閉方向(平行方向)に分光され、対する垂直方向は位置情報を保ったまま、分光器出口のCCD受光面に投影される。試料ステージを走査して任意の視野で一連の画像データを得たのち、分光イメージを再構築する仕組みである。画像取得には、超高感度EM(Electron Multiplying)-CCD検出器を用いることにより、微弱な蛍光シグナルやさらに数桁シグナル強度が弱いラマン散乱光による分光・イメージング解析を想定した顕微鏡システムの土台が完成した。既に蛍光ビーズや輝線光源を用いたシステム評価を行い、蛍光アンミキシング解析やラマンイメージングが十分可能な波長分解能であることを確認した。現在は、蛍光蛋白質を発現している生体試料を用いた評価実験およびシステム制御と画像構築・解析まで一括して行うためのプログラムの開発を行っている。今後は、多様な試料形態で多色同時蛍光イメージングへの実用化を目指して、チャンバーや試料保持方法、レーザー照射方法などの工夫を行っていく予定である。
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[Journal Article] Planar polarity of multiciliated ependymal cells involves the anterior migration of basal bodies regulated by non-muscle myosin II2010
Author(s)
Yuki Hirota, Alice Meunier, Shihhui Huang, Togo Shimozawa, Osamu Yamada, Yasuyuki S.Kida, Masashi Inoue, Tsubasa Ito, Hiroko Kato, Masanori Sakaguchi, Takehiko Sunabori, Masa-aki Nakaya, Shigenori Nonaka, Toshihiko Ogura, Hideo Higuchi, Hideyuki Okano, Nathalie Spassky, Kazunobu Sawamoto
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Journal Title
Development
Volume: 137
Pages: 3037-3046
Peer Reviewed
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[Presentation] Live imaging of the whole mouse embryo during gastrulation2010
Author(s)
Takehiko Ichikawa, Philipp Keller, Ernst Stelzer, Shigenori Nonaka "Live imaging of the whole mouse embryo during gastrulation
Organizer
3rd Annual Meeting for the Japanese Society of Developmental Biologists Jointly Sponsored by the Asia-Pacific Developmental Biology Network
Place of Presentation
京都国際会館(京都市)
Year and Date
20100620-20100623
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