2010 Fiscal Year Annual Research Report
化学療法剤による腎障害の発現機序解明および予防策の確立に関する研究
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21790242
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
矢野 貴久 九州大学, 大学病院, 技術職員 (90532846)
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| Keywords | 腎障害 / 抗菌薬 / アポトーシス / カスパーゼ / ミトコンドリア |
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| Research Abstract |
(研究目的)抗菌薬や抗腫瘍薬といった化学療法剤は、副作用として腎障害を引き起こすことが広く知られており、その頻度は他の薬剤と比べても顕著に高い。しかしながら、多くの薬剤では腎障害発現機序の詳細が依然として不明であり、臨床現場では治療薬物モニタリング(TDM)による血中濃度管理や排泄促進を目指した輸液療法等が実施されているものの、腎障害への対策は十分とは言えないのが現状である。
本研究では、昨年度の研究において作製した化学療法剤による腎障害評価モデルを用いて、腎障害発現機序の詳細な解明を行った。
(研究方法)アムホテリシンB(AmB)や塩酸バンコマイシン(VCM)等の抗菌薬をブタ近位尿細管由来LLC-PK1細胞に曝露して細胞障害を誘導し、WST-8法ならびに乳酸脱水素酵素(LDH)漏出量測定により細胞生存率の変化を評価した。アポトーシスおよびネクローシスの判定には、Amexin V/Propidium iodideの二重染色法およびTUNEL染色法を用い、蛍光顕微鏡およびフローサイトメトリーにより評価した。カスパーゼ活性は、蛍光前駆基質を用いたアッセイ法にて測定した。ミトコンドリア機能評価は、ミトコンドリア膜感受性試薬JC-1を用いた。活性酸素(ROS)は、carboxy-H2DCF-DAを用いて検出した。
(研究成果)VCMは腎尿細管細胞に対して、濃度および時間依存的なアポトーシスを引き起こすことが明らかとなった。加えて、その障害発現には、ROSやミトコンドリア機能異常が重要な役割を担っており、ミトコンドリアからのチトクロームC遊離が、カスパーゼ-9およびカスパーゼ-3活性化を引き起こし、腎細胞はアポトーシスに至ることが明らかとなった。
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