2009 Fiscal Year Annual Research Report
上皮成長因子様ドメインに特徴的な新規翻訳後修飾の同定と修飾機構の解析
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21790270
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
岡島 徹也 Nagoya University, 大学院・医学系研究科, 准教授 (20420383)
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| Keywords | O-GlcNAc / Notch / 糖転移酵素 |
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| Research Abstract |
Notch受容体の上皮成長因子(EGF)ドメイン上には、特異的なO-結合型糖鎖が存在しており、その機能に重要な役割を果たしている。これまでの研究で、O-結合型糖鎖の1つして、O-N-アセチルグルコサミン(O-GlcNAc)修飾という新規の翻訳後修飾をショウジョウバエS2培養細胞において同定し、新規糖転移酵素E-OGTがその修飾に関与する可能性が示唆された。そこで、本研究課題においては、細胞外におけるO-GlcNAc修飾が進化的に保存された翻訳後修飾であるか検討するために、哺乳動物培養細胞を用いて発現させたNotch受容体の細胞外ドメインのO-GlcNAc修飾の同定を試みた。特異抗体を用いた解析結果、ショウジョウバエ同様、O-GlcNAc抗体との反応性が確認された。しかしながら、単糖ではなく、オリゴ糖としてO-GlcNAc型糖鎖が存在する可能性も十分考えられるため、引き続き検討している。また、E-OGTをHEK293細胞にトランスフェクトし、タグを用いて組み換えタンパク質を精製した。過去に報告したアッセイ条件を用いて、E-OGTの酵素活性をNotch受容体由来の20番目のEGFドメイン(EGF20)を受容基質として用いて測定したところ、UDP-GlcNAcに特異的な酵素活性を示した。今後、様々な糖供与体やEGF20以外の異なるEGFドメインを用いた基質特異性の解析や、酵素反応産物の解析を進めていく予定である。
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