2012 Fiscal Year Annual Research Report
独自のマイクロチップと増幅法を駆使したＰＯＣＴデバイスの開発
| Project/Area Number |
22500448
|
|---|
| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
|---|
Principal Investigator |
細川 和生 独立行政法人理化学研究所, 前田バイオ工学研究室, 専任研究員 (00373366)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
|
| Keywords | マイクロチップ / イムノアッセイ / ポイント・オブ・ケア / 疾患マーカー / 臨床検査 / 抗体 |
|---|
| Research Abstract |
本課題の目的は，二つの独自技術「自律駆動マイクロチップ」と「層流樹状増幅法（LFDA）」により簡便・迅速で高性能なイムノアッセイ検査を実現することであった．これまでに，前立腺がんのマーカーである前立腺特異抗原の高感度検出を実現し，さらに，3種類のがんマーカータンパク質の同時検出にも成功した．本年度は，新しいがんマーカーとして注目されているマイクロRNAの検出を試みた．
マイクロRNAはイムノアッセイと同様の原理で検出することができる．すなわち，ターゲットRNAと相補的な配列を持ったプローブDNAを，抗体の代わりにターゲットと結合させれば良い．この実験ではヒトmiR-21（２２塩基）をターゲットとして，そこに同時に結合できる２種類のプローブDNA（捕捉プローブと検出プローブ，各１１塩基）を設計した．捕捉プローブをガラス基板に固定化し，そこにPDMS流路を接合することにより，マイクロチップを完成した．自律駆動法とLFDAを用い，イムノアッセイと同じ要領で（2次抗体の代わりに検出プローブを注入）検出を行った．サンプル体積は0.5 μLとした．
増幅反応開始から数分で，捕捉プローブを固定した位置において蛍光強度が指数関数的に増加した．この増加が始まる時間はマイクロRNA濃度に依存し，高濃度な場合ほど早期に信号増加が開始した．しかしその増加開始時間には若干のばらつきがあり，またブランク（濃度ゼロ）の場合にも信号増加が見られた．そこで常に参照溶液としてブランクを流し，サンプル溶液との比較によってセンサーの応答を定義することにした．その応答をサンプル濃度に対してプロットしたところ，検出限界値として0.5 pM が得られた．以上から，本研究の方法がマイクロRNAに対しても有効であることが分かった．
|
| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
|
| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
|
