2015 Fiscal Year Annual Research Report
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25460362
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
足立 誠 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30335244)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 細胞質分裂 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
CRISPR/Cas9のシステムを用いてIQGAP3およびIQGAP1のノックアウトHeLa細胞を複数株樹立し、それらの細胞質分裂過程における異常を検討している。しかし細胞株ごとの表現型に非常に大きなばらつきがあり、各分子の機能を正確に記述できない状況である。現在あらためて各ノックアウト細胞における遺伝子の変異導入の性状を確認し直しているが、併せて異なる細胞種でのノックアウト細胞株の作製も並行して進めている。分子間相互作用の検討および機能解析に必要なIQGAP3の様々なドメインの組換え蛋白質の発現精製を行なっている。昆虫細胞発現系を用いた条件検討の結果、MBPなどの可溶性タグを付加することで十分な発現量を得ることができたドメインがあった一方、様々な改良を試したにもかかわらず全く発現の得られないドメインもあった。現在前者については生化学的解析を進めている。なお、哺乳類細胞発現系も検討していたが、遺伝子導入法の問題（発現量が不安定・高額の費用が必要・など）および低発現量の問題を克服できなかった。IQGAP3と結合し、かつ細胞質分裂への機能的関与が示唆されていた複数の因子について解析を行なったが、いずれもIQGAP3による細胞質分裂制御との機能的な関連性は明らかにできていない。ただ、うち一つの因子について、細胞質分裂とは異なる側面での機能的な関連が疑われたことから、現在その解析を行なっている。IQGAP3と癌との関連については、十分な解析を進めることができなかった。
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