転写因子としてのポリADPリボース合成酵素(PARP)の役割の解明
Project/Area Number |
02J10306
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Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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Allocation Type | Single-year Grants |
Section | 国内 |
Research Field |
General medical chemistry
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Research Institution | Tohoku University |
Principal Investigator |
秋山 貴子 東北大学, 大学院・医学系研究科, 特別研究員(PD)
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Project Period (FY) |
2002 – 2004
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 2004)
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Budget Amount *help |
¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
Fiscal Year 2004: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2003: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
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Keywords | ポリADPリボース合成酵素(PARP) / Reg / 転写 / DNA結合ドメイン / レコンビナント蛋白 / Gel Mobility Shift Assay / Southwestern法 / DNA affinity chromatography / ポリADPリボース不合成酵素(PARP) / リコンビナント蛋白 |
Research Abstract |
研究代表者は、インスリン産生細胞再生増殖因子であるRegの発現はReg遺伝子の転写誘導によること、またその転写誘導は、ポリADPリボース合成酵素(PARP)が転写因子としてReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合し、その他複数の因子をリクルートし転写複合体を形成することで引き起こされることを明らかにした。そこで本研究ではPARPが転写因子として機能する際にPARP蛋白のどのドメインがReg遺伝子プロモーター領域に特異的に結合して機能しているのかを明らかにすることで、転写因子としてのPARPによる遺伝子発現機構を解明する。 平成16年度の研究は以下のように進行した。 1.前年度にリコンビナントPARP、野生型(558 unit/mg,711μg)、HAタグ付野生型(570 unit/mg,621μg)、zinc figer motif変異型(154 unit/mg,190μg)を得た。これらの精製蛋白質等を用いて、Electromobility Shift Assay(EMSA法)で、Reg promoter領域への配列特異的結合を検討した。 2.野生型PARPはラットReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合した。DNA probeに一塩基ずつ変異を導入したcold competitorを用いてEMSA法を行い、PARPの結合認識配列を検討したところ、GC box類似の配列5'-TGCCCTCCCAT-3'において下線で示す塩基がPARPの結合に必須の塩基配列であることを明らかになった。また、この配列はラット、マウス、ヒトのReg遺伝子プロモーター領域においてよく保存されていた。 3.zinc finger motif変異型PARPはReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に対して結合活性を示したが、結合に上述の配列特異性が失われていた。野生型PARPにおける配列特異的な結合にzinc finger motifが関与していることが示された。
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Report
(3 results)
Research Products
(34 results)
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[Journal Article] Molecular cloning, expression and chromosomal localization of a novel human REG family gene, REG III.2004
Author(s)
Nata, K., Liu, Y., Xu, L., Ikeda, T., Akiyama, T., Noguchi, N., Kawaguchi, S., Yamauchi, A., Takahashi, I., Shervani, J., Onogawa, T., Takasawa, S., Okamoto, H.
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Journal Title
Related Report
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[Journal Article] Autoantibodies to REG, a beta-cell regeneration factor, in diabetic patients.2004
Author(s)
Shervani, NJ., Takasawa, S., Uchigata, Y., Akiyama, T., Nakagawa, K., Noguchi, N., Takada, H., Takahashi, I., Yamauchi, A., Ikeda, T., Iwamoto, Y., Nata, K., Okamoto, H.
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Journal Title
European Journal of Clinical Investigation 34
Pages: 752-758
Related Report
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[Journal Article] Cyclin D1 activation through ATF-2 in Reg-induced pancreatic beta-cell regeneration.2004
Author(s)
Takasawa, S., Ikeda, T., Akiyama, T., Nata, K., Nakagawa, K., Shervani, NJ., Noguchi, N., Kawaguchi, S., Yamauchi, A., Tomioka-Kumagai, T., Unno, M., Matsuno, S., Okamoto H.
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Journal Title
Related Report
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[Journal Article] Reg蛋白質による細胞周期活性化機構2004
Author(s)
高沢伸, 池田崇之, 野口直哉, 那谷耕司, 秋山貴子, 山内晶世, 川口晶子, 高橋 巌, 吉川雄朗, 小野川徹, 岡本 宏
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Journal Title
Related Report
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[Journal Article] マウス胎児肝におけるインスリン遺伝子IとIIの発現2004
Author(s)
川口晶子, 小野川徹, 那谷耕司, 秋山貴子, 池田崇之, Nausheen J.Shervani, 山内晶世, 高橋 巌, 野口直哉, 高沢 伸, 岡本 宏
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Journal Title
Related Report
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[Journal Article] Molecular cloning and characterization of Xenopus cyclic ADP-ribose synthesizing enzyme, CD38.2004
Author(s)
池田崇之, 野口直哉, 那谷耕司, 秋山貴子, 川口晶子, 山内晶世, 高橋巌, 吉川雄朗, 高沢伸, 岡本宏
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Journal Title
Related Report
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[Journal Article] REG (Regenerating gene) expression in human colon and gastric cancer cells.2004
Author(s)
山内晶世, 高橋巌, 杉本和敏, 那谷耕司, 野口直哉, 秋山貴子, 池田崇之, 吉川雄朗, 小野川徹, 鈴木巌, 高沢伸, 岡本宏
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Journal Title
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