| 研究課題/領域番号 |
06807156
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
外科系歯学
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
朝比奈 泉 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (30221039)
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| 研究分担者 |
大井田 新一郎 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (10114745)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1995年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1994年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | BMP / OP-1 / 骨誘導 / 遺伝子 / 骨形成因子 / 骨芽細胞 / 分化 |
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| 研究概要 |
当研究では、BMPの作用機序を解明することを目的とし、mRNA Differential Display法を用いて、BMPを作用させた際に非常に早い段階で誘導され、BMPの作用をコントロールしている可能性のある遺伝子の解析を行なった。
BMPとしては、高純度リコンビナント標品として入手可能であったOP-1 (BMP-7) を用いた。OP-1に反応する細胞株の検索を行った結果、骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1および骨髄由来幹細胞株ST2が、OP-1に反応して骨芽細胞のマーカーであるアルカリフォスファターゼ活性が著明に上昇することがわかった。そこで、これらの細胞にOP-1を24時間作用させAGPC法を用いtotal RNAを調整した。Differential Display法に従い得られたcDNAを20種類の組合せのプライマーを用い^<35>SdATPの存在下にPCRを行った。これをシークエンスゲル上に電気泳動し、オートラジオグラフィー上でOP-1を作用させたものと、対照群とを比較、検討した。その結果、MC3T3-E1について66個、ST2について11個の明らかに差異を認めるDNAフラクメントが得られた。HC3T3-E1より得られたDNAフラクメントはサフクローニンクを行い、塩基配列の解析を行った。ユビキチン、SP-1など既知のシークエンステ-タと高いホモロジーを示すものが存在したが、多くのものは3′末端の200〜300塩基対のもので充分な解析はできなかった。また、これらについてノーザン解析を行ったが、多くのものは大きな差がなく、偽陽性である可能性が高かった。しかし、ST-2から得られたクローンのうち 2つは明らかな差異を認めた。そこで 現在このクローンのシークエンス解析を実行中である。
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