| 研究課題/領域番号 |
09680606
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
構造生物化学
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| 研究機関 | 国立循環器病センター |
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研究代表者 |
加藤 久雄 国立循環器病センター研究所, 病因部, 部長 (80029959)
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| 研究分担者 |
原 三郎 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 教授 (00028193)
大蔵 直樹 国立循環器病センター研究所, 病因部, 流動研究員
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
1998年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
1997年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | プロテアーゼインヒビター / 血液凝固 / 血栓 / 動脈硬化 / ヘパリン / 抗血栓 |
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| 研究概要 |
1。 TFPIのトロンビンによる分解
TFPIは血漿中では、遊離型のほか、LDLやHDLなどのリポタンパク質と結合して存在するが、さらに,種々のプロテアーゼの作用をうけた分解型も存在していることが示唆されている。我々は、これらの分解がどのようなプロテアーゼにより生成し、またその機能がどのように変化するのかを明らかにするために、ヒト組換え型TFPIに種々のプロテアーゼを作用させ、その分解形式を解析した。その結果、トロンビンはTFPIの3つのペプチド結合を切断することによりTFPIの抗凝固活性を失活させることを見いだした。
2。 TFPIとヘパリンの結合
TFPIとヘパリンの結合様式を解析するために、ヘパリンおよびその硫酸基を特異的に脱離したヘパリンとTFPIの結合を解析し、N位硫酸基>2位硫酸基>6位硫酸基の順に結合能は低下したが、解離定数には大きな差はなく、いずれの硫酸基もTFPIとの結合に関与していると考えられた。次に、ヘパリン少糖類を調製し、ヘパリン2,4糖もTFPIに結合するが、さらに6-8糖に鎖長が延びるにつれ強く結合し、14糖以上ではもとのTFPIと同じ結合の強さを示した。TFPIには2つのヘパリン結合部位、K3ドメインとC末端側塩基性ペプチド、が存在するので、これらの部位とヘパリンの結合を別々に解析した。
C末端側塩基性部分(HBS-1)との結合にはArg257とArg259が最も重要であることが明らかとなった。K3領域(HBS-2)とヘパリンの結合を解析するために、カイコを用いるK3の発現系を構築し、その体液より。K3組換え体を調製した。このようにして調製したK3組換え体を用いて、ヘパリンおよび修飾ヘパリンとの結合の強さを解析し、ヘパリンのN位、6位および2位の硫酸基もいずれもほぼ同等の寄与を示すことを明らかにした。
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