| 研究課題/領域番号 |
11480175
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
機能生物化学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
横沢 英良 北海道大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (90012765)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
12,300千円 (直接経費: 12,300千円)
2001年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
2000年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1999年度: 8,500千円 (直接経費: 8,500千円)
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| キーワード | プロテアソーム / 出芽酵母 / 増殖 / 制御サブユニット / ユビキチンレセプター |
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| 研究概要 |
本研究では、26Sプロテアソーム構築の制御機構の解明を目指して解析し、以下の成果をあげた.
1.出芽酵母から、26Sプロテアソームの活性を制御する制御サブユニット複合体(19S複合体)を簡便に単離する方法を確立した。さらに、イオン交換クロマトグラフィーを用いて、出芽酵母から単離した19S複合体をさらに2つのサブ複合体、Lid(蓋部)複合体とBase(基底部)複合体に解離させる方法を確立した。そして、単離したサブ複合体のサブユニット組成を解析し、ユビキチン鎖認識サブユニット(ユビキチンレセプター)であるRpn10がLid複合体の構成成分であることを明らかにした。2.Rpn10がLidとBaseの2つのサブ複合体をつなぎとめている役割を果たすと考えられるので、26Sプロテアソーム構築に対するRpn10の役割を調べた。RPN10遺伝子の完全破壊株や各種欠失株における増殖、26Sプロテアソーム量、あるいは、温度感受性rpn12-1変異株の温度感受性を多コピー抑圧できるか否かについて解析し、Rpn10のN末端ドメィンが26Sプロテアソーム構築に重要な役割を果たしていると推論した。3.Rpn10に加えて、Rad23やDsk2などのユビキチン様蛋白質がユビキチンレセプターとして機能していることを明らかにした。4.酵母two-hybrid systemを用いて、19S複合体サブユットRpn12と相互作用する蛋白質として、Nob1を単離した。Nob1蛋白質は、対数増殖期には存在するが、対数増殖期から定常期への移行に伴って26Sプロテアソームによって分解され定常期には存在しないことが明らかになった。また、対数増殖期では、Nob1が26Sプロテアソームに結合していることも明らかになった。以上の結果から、Nob1は増殖依存的に26Sプロテアソーム構築に関与する因子の候補であると考えられる。
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