DNA 損傷に応答して PCNAをユビキチン化するヒト HLTFの構造生物学的研究

• 研究課題/領域番号: 23770125
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 構造生物化学
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 菱木 麻美 横浜市立大学, 大学院・生命ナノシステム科学研究科, 特任助教 (60571172)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2012年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円); 2011年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
• キーワード: X線結晶解析 / 国際情報交流

研究概要

HLTF は DNA 損傷による複製停止を回避する戦略の一つであるテンプレートスイッチに関与する。HLTF はユビキチンリガーゼ活性を持つ RING ドメインと DNA へリカーゼ活性を持つ Snf2 ドメインを併せ持つ特殊なタンパク質であり、さらに新奇 DNA 結合ドメインと予想される HIRAN ドメインを持つことが知られている。本研究ではヒト HLTF (hHLTF) RING ドメインの試料調製、hHLTF HIRAN ドメインの調製および結晶化を行い、hHLTF HIRAN ドメイン-DNA複合体の構造解析を行った。 さらに、hHLTF HIRAN ドメインと DNAとの相互作用解析を行い、hHLTF HIRAN ドメインの DNAとの結合に重要な残基を特定した。

研究成果

• [雑誌論文] En bloc transfer of polyubiquitin chains to PCNA in vitro is mediated by two different human E2-E3 pairs (2012)
  • 著者名/発表者名: Masuda Y
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res. 巻: 40(20) 号: 20 ページ: 10394-10407
  • DOI: 10.1093/nar/gks763
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of a small molecule PCNA inhibitor that disrupts interactions with PIP-Box proteins and inhibits DNA replication (2012)
  • 著者名/発表者名: Chandanamali Punchihewa, Akira Inoue, Asami Hishiki, Yoshihiro Fujikawa, Michele Connelly, Benjamin Evison, Youming Shao, Richard Heath, Isao Kuraoka, Patrick Rodrigues, Hiroshi Hashimoto, Masanobu Kawanishi, Mamoru Sato, Takashi Yagi, Naoaki Fujii
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 287 号: 17 ページ: 14289-14300
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.353201
  • 査読あり
• [学会発表] ヒト PCNA のポリユビキチン化の新規分子機構 (2012)
  • 著者名/発表者名: 増田雄司, 鈴木美紀, 河合秀彦, 菱木麻美, 橋本博, 益谷央豪, 神谷研二
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
• [学会発表] Crystal structures of human PCNA in complex with small molecule inhibitors for cancer therapeutics (2012)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto H, Kikuchi S, Hishiki A, Punchihewa C, Fujii N, Sato M
  • 学会等名: AsCA 12/CRYSTAL 28
  • 発表場所: Aderaide Convention Centre
• [学会発表] En bloc transfer of poly-ubiquitin chains to PCNA in vitro is mediated by two different human E2-E3 pairs (2012)
  • 著者名/発表者名: Masuda Y, Suzuki M, Kawai H, Hishiki A, Hashimoto H, Masutani C, Hishida T, Suzuki F, Kamiya K
  • 学会等名: The 8th 3R Symposium
  • 発表場所: Awaji Yumebutai International Conference Center
• [学会発表] 抗がん剤併用薬開発に向けた PCNAと阻害剤との複合体構造 (2012)
  • 著者名/発表者名: 菊池壮太郎, 菱木麻美, Chandanamali Punchihewa, 藤井直明, 佐藤衛, 橋本博
  • 学会等名: 第12回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場
• [学会発表] ヒトPCNAのポリユビキチン化の新規分子機構 (2012)
  • 著者名/発表者名: 増田雄司, 鈴木美紀, 河合秀彦, 菱木麻美, 橋本 博, 益谷央豪, 神谷研二
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
• [学会発表] En bloc transfer of poly-ubiquitin chains to PCNA in vitro is mediated by two different human E2-E3 pairs. (2012)
  • 著者名/発表者名: Masuda, Y., Suzuki, M., Kawai, H., Hishiki, A., Hashimoto, H., Masutani, C., Hishida, T., Suzuki, F., Kamiya, K.
  • 学会等名: The 8th 3R Symposium
  • 発表場所: Awaji Yumebutai International Conference Center
• [学会発表] 抗がん剤併用薬開発に向けたPCNAと阻害剤との複合体構造 (2012)
  • 著者名/発表者名: 菊池壮太郎、菱木麻美、Chandanamali Punchihewa、藤井直明、佐藤衛、橋本博
  • 学会等名: 第12回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 第12回日本蛋白質科学会年会